一九四一年十月二十五日，赵敏芬出生于江苏省苏州市。她于一九六四年顺利完成学业，从中央戏剧学院表演系毕业，为其日后投身表演艺术事业奠定了坚实的专业基础。
在一九八八年，由赵敏芬担任主演的一部共计三集的喜剧作品《燕山夜话新说》正式与广大观众见面。时隔三年，即一九九一年，她于八一电影制片厂出品、并由李俊担任总导演的系列电影《大决战》中精彩演绎了重要历史人物宋庆龄女士。次年，也就是一九九二年，赵敏芬又出演了电视剧《让我们荡起双桨》，并在其中塑造了梁若岚这一角色。同样是在这一年，她参与演出的一部历史战争题材电影《大决战之平津战役》举行了首映礼，她于片中再次饰演了宋庆龄一角。进入一九九三年，赵敏芬在电影《重庆谈判》中第三次诠释宋庆龄，这部影片凭借其出色的艺术水准先后荣获了“华表杯”政府优秀影片奖以及第十七届大众电影百花奖优秀影片奖等多项重要荣誉；同年，她还与知名演员李法曾、傅艺伟共同主演了历史题材剧集《汉王刘邦》，并在剧中成功塑造了吕后这一复杂而深刻的历史人物形象。
一九九九年，在丈夫李法曾与儿子李东的鼓励与支持下，她参与了由李平、孙树培共同执导，赵薇、苏有朋、张铁林等联袂主演的古装爱情剧《还珠格格第二部》，并在其中成功塑造了太后老佛爷这一角色，由此开始为广大观众所熟知。随后，她在《还珠格格》中饰演了皇太后（左），在《还珠格格》中饰演了皇太后（右），在《还珠格格》中再次饰演皇太后（左），并在《还珠格格》中继续以皇太后形象亮相（右）。进入二〇〇〇年，她在胡军、刘烨主演的电影《蓝宇》中出演了男主角捍东的母亲；同年，她又加盟了由张国立、张铁林、王刚主演的历史戏说剧《铁齿铜牙纪晓岚》，再度诠释了皇太后这一重要角色。二〇〇一年，她参与了赵亮、朱磊、宋妍主演的《风流才子纪晓岚》的拍摄，在剧中又一次扮演了皇太后；也是在这一年，她与何赛飞合作主演了家庭剧《婆媳过招》，饰演了角色张曼琳。《婆媳过招》中则记录了她饰演张曼琳的剧照（右）。二〇〇二年，她在佟大为、孙俪主演的海岩剧《玉观音》中出演了铁军母亲一角。二〇〇三年，作为原班人马之一，她在黄奕、古巨基、王艳主演的老版《还珠格格》系列的完结作品《还珠格格第三部》中，又一次以太后形象登场。《还珠格格第三部》中亦呈现了她饰演太后的画面。二〇〇四年，她在刘涛、陈司翰、邱心志主演的清朝情感大戏《原来就是你》中，饰演了葛老太太这一角色。二〇〇六年，她于刘雪华、施羽主演的民国家庭情感剧《春天后母心》中，化身边老太太。二〇〇七年，她在六月、赵毅、杨晨主演的古装志异剧《聊斋志异2之婴宁》中出演了王老太太；同年，她还参演了由朱琳、刘之冰主演的亲情剧《家有爹娘》，在剧中饰演了黄爱玲。
二零零八年，一部聚焦徽商群体、深入展现其传统管理哲学、经营策略与用人智慧的电视剧《新安家族》与观众见面，演员在其中饰演了汪老太太这一重要角色。这部作品经过精心筹备与制作，最终于二零一零年十一月七日首次登陆电视荧屏，正式与广大观众会面。时光流转至二零一九年二月一日，一档备受关注的真人秀节目《王牌对王牌》推出了它的第四季内容，在当期的节目录制中，曾因饰演“老佛爷”而深入人心的赵敏芬与以“晴格格”形象著称的王艳，二人身着观众熟悉的戏服惊喜亮相。她们不仅在节目中再度同框，还携手合作表演了一段精彩的小品，这一幕瞬间唤起了无数观众对于往日经典荧屏记忆的深切怀念与情感共鸣。
赵敏芬与她的丈夫李法早年一同求学于中央戏剧学院，是同窗校友。在随后的艺术生涯中，这对夫妇曾多次携手合作，共同参演了包括《汉王刘邦》《大决战》《重庆谈判》以及《新安家族》在内的多部影视剧作品，在荧幕上留下了许多令人印象深刻的表演。他们的儿子李东同样投身于戏剧影视行业，目前在国家话剧院任职，主要从事影视制片与项目策划等相关工作，延续着家庭的艺术传承。